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試作品
微生物検出キット（蛍光）
-Bacstain- CTC Rapid Staining Kit for Flow cytometry / for Microscopy

＜特長＞
  • スピーディーで高感度な生菌のCTC染色が可能です。
  • 少量小分け品ですので使いやすくなっております。

　細菌検出用の蛍光試薬として、AO, DAPI, SYBR Greenなどのような生・死全菌染色剤、 Invitrogen 社の LIVE/DEAD®BacLight. Bacterial Viability Kit（以下、BacLight）に代表されるような、生・死二重染色キットが汎用されています1-3)。 BacLightは細胞膜透過性の異なる2つの核染色試薬（SYTO 9 及び PI）により同時染色することで、生細胞（膜損傷なし）及び死細胞（膜損傷あり）を見分けます。その他、細胞内酵素 (エステラーゼ活性)を指標とした CFDAも汎用されます。

　一方、CTCは呼吸活性による電子伝達系により還元され、蛍光性の formazan を生成するという特性をもちます。この菌の代謝に応じ蛍光を発する点で注目され、生菌に選択的な蛍光試薬として汎用されてきましたが、染色性が悪いという問題を抱えておりました。

　この度、小社で開発しました -Bacstain- CTC Rapid Staining Kit は、CTC染色時に enhancer を加えることで、CTCでの染色をより迅速・高感度にできるキットです。CTC単独では染色されなかった乳酸菌や真菌においても、同キットにて染色されることが確認できました。


＜キット内容＞　※各100 assays用となります。
Flow cytometry用と蛍光顕微鏡用の2種類をご用意しておりますので、検出系にあったキットをお選び頂けます。

for Flow cytometry
  • CTC　　10 mg × 3 tubes
  • Enhancing reagent A （DMSO solution） 　0.1 ml

for Microscopy
  • CTC　　10 mg × 3 tubes
  • Enhancing reagent B （aqueous solution）　　0.5 ml

＜本キット以外に必要なもの＞
  • マイクロピペット
  • インキュベーター（25〜37℃）
  • マイクロチューブ
  • 遠心機（マイクロチューブ用）


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染色画像

CTC-SYBR Greenによる大腸菌のニ重染色

CTC-DAPIによる枯草菌のニ重染色

AOによる乳酸菌の染色

顕微鏡：Axio Observer. Z1（Carl Zeiss）
フィルター：
CTC 　　OMEGA XF21 (Ex 480DF60, Em 635DF55)
AO, SYBR® Green 1 　　ZEISS Filter Set.38 (Ex BP470/40, Em BP525/50)
DAPI 　　ZEISS Filter Set.49 (Ex G365, Em BP445/50)


参考文献

1)　染谷孝, “蛍光染色による土壌微生物の検出法”, 月刊 海洋 培養不能細菌 -VNC研究の現状と課題-, 2003, No.33, p.14.

2)　平石明, 吉田奈央子, “活性汚泥における培養不能な細菌の検出”, 月刊海洋培養不能細菌 -VNC研究の現状と課題-, 2003, No.33, p.48.

3)　M.Kawai, N.Yamaguchi and M.Nasu, “Rapid Enumeration of Physi-ologically Active Bacteria in Purified Water Used in the Pharmaceuti-cal Manufacturing Process”, J. Appl. Microbio. , 1999, 86, 496.


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