Biotin-SAM Formation ReagentB564 取扱説明書

　QCM や SPR 等のバイオセンサーに SAMs を介してタンパク質を固定化する方法としては、末端カルボン酸のSAM を活性化してタンパク質のアミノ基と反応する方法、Ni-NTA を有するSAM に His-Tag タンパク質を固定化する方法、 ビオチン-SAM を介してアビジンを固定化した基板表面にビオチン化タンパク質を固定化する方法 (ビオチンーアビジン法)などがあります。その中でもビオチンーアビジン法は迅速に且つ強固にタンパク質を固定化できることから汎 用されている方法です。

　本製品は、金基板上に Streptavidin や NeutrAvidin などのアビジン類を効率的に固定化するためのビオチンSAM作製用試薬です。本試薬を用いて作成したビオチンSAMは、従来品に比べより多くの Streptavidin を固定化することができます。また、Streptavidin 結合後の表面はタンパク質の非特異的吸着を抑制することができます。

図1 Biotin-SAM Formation Reagent を用いたバイオセンサー作成の模式図

Biotin-SAM Formation Reagent

1 μmol x 3

0~5°Cで保存してください。

1. 本試薬1チューブにエタノール 1ml を添加してピペッティングにより溶解し、1mmol/l Biotin-SAM 溶液とする^※1。さらに、この溶液をエタノールで 10倍希釈し、操作 2.に使用する。
2. Piranha 溶液 ^※2等で洗浄した金基板を、操作 1. で調製した溶液に浸漬し、1時間室温で静置する。
3. この基板をエタノール、超純水の順で数回洗浄する^※3。

1. 溶解しにくい場合は、超音波照射あるいは40℃程度に加温してください。エタノール溶解後はすぐにご使用ください。
2. 濃硫酸：過酸化水素水＝3：1の混合溶液です。腐食性が非常に強いため、取り扱いには十分ご注意ください。
3. 作成した Biotin-SAM 基板は、密閉性の高いガラス瓶等に入れ、窒素置換して冷蔵（0～5℃）にて保存してください。

QCM 基板上への Streptavidin 固定化および性能確認

1. 本試薬を用いて Biotin-SAM をコートした基板(QCM 用）をセルにセットし、PBS 450 μl をセルに添加した。
2. QCM を用いて振動数変化を測定し、振動数が安定したことを確認した後、10 mg/ml Streptavidin (PBS) 20 μl を添加した。
3. 振動数変化を測定し、Streptavidin の固定化をモニタした。
4. 振動数が安定した後、10 mg/ml BSA (PBS) 8 μl を添加して測定、さらに 10mg/ml FBS (PBS) 8 μl を添加して測定を行った。
5. 一旦セルを装置から外し、セル内をPBSで洗浄した。
6. 再びセルを装置にセットし、セルに PBS 450 μl を添加した。
7. 振動数変化を測定し、振動数が安定したことを確認した後、12mg/ml Biotin-BSA (PBS) 8 μl を添加した。