-Bacstain- PI solutionBS07 取扱説明書

-Bacstain- series は細菌用の蛍光染色試薬群です。異なる 3 つの手法（下図）から菌の生存率を求める事ができます。Propidium iodide (PI) は Ethidium bromide (EB) の類似体であり、二本鎖の DNA に intercalate して赤い蛍光を発します。PI は正常な膜をもつ細胞内には透過せず、損傷した膜を持つ細胞にのみ細胞膜を透過し核酸を染色します。このことから、CFDA のような生菌に選択的な蛍光色素との同時染色に用いられます。

PI 溶液

25 μl x 4 、濃度：1 mg/ml

-20℃ 以下で保存して下さい。

• 蛍光顕微鏡 (blue or green excitation light, red emission filter) または Flow cytometer (488 nm or 533 nm laser, red emission filter)
• マイクロピペット (20 μl, 1,000 μl)

• 本キットには溶液の入ったマイクロチューブのコンポーネントが含まれています。チューブ内壁やキャップに溶液が付着していることがありますので、開封前に振り落としてからご使用ください。

1. 凍結した PI 溶液を室温にて 30 分間静置し融解する。この際遮光を行なうこと。^a)
2. 菌を PBS(-) もしくは生理食塩水に懸濁し、細胞密度を調整する。10⁶ cells/ml (flow cytometry) 10⁸ -10⁹ cells/ml (microscopy)
3. 細胞懸濁液 1 ml に対し、PI 溶液 1 μl を加え良く混合する。
4. 室温にて 5 分間インキュベートする。
5. フローサイトメーターまたは蛍光顕微鏡で観察する。

a) PI は変異原性が疑われるため、操作及び廃棄には注意が必要である。 

本マニュアルに準じた場合、約 100 検体分の測定が可能です。

-Bacstain- CFDA solution や -Bacstain- DAPI solution との二重染色実験が可能です。

1. N. Yamaguchi and M. Nasu, " Flow cytometric analysis of bacterial respiratory enzymatic activity in the natural aquatic environment ", J. Appl. Microbiol., 1997, 83, 43.

-Bacstain- CTC Rapid Staining Kit (for Flow cytometry)

-Bacstain- CTC Rapid Staining Kit (for Microscopy)

CTC は菌の呼吸活性により還元を受け、蛍光性 formazan を生成します。生菌に選択的な蛍光色素として、多く用いられ ています。
-Bacstain- CTC Rapid Staining Kit はエンハンサーの効果により、従来の CTC 染色をより迅速・高感度にできるキットです。

 

Enhancing reagent の添加によりCTC 染色能が大きく向上します。

 

-Bacstain- CFDA solution

CFDAはステラーゼ活性により蛍光を発する色素として、菌染色で広く用いられています。
-Bacstain- CFDA solution は CFDA を DMSO 溶液としていますので、調製の手間無くご使用頂けます。
CFDA はそれ自体では蛍光を持ちませんが、細胞内に存在するエステラーゼにより蛍光性のカルボキシフルオレセインとなります。

 

-Bacstain- DAPI solution , AO solution

DAPI 及び AO は核酸染色試薬として頻用されます。膜損傷の有・無 に関わらず細胞内に透過し、核酸を染色します。

 

Products	Code	Maximum Ex/Em(nm)	Number of assays
CTC Rapid Staining Kit (for Flow cytometry)	BS01	430, 480/630	100
CTC Rapid Staining Kit (for Microscopy)	BS02	430, 480/630	100
CFDA solution	BS03	493/515	100
DAPI solution	BS04	360/460	100
AO solution	BS05	420-460/630-650(ssDNA)	100
		500/520(dsDNA)
PI solution	BS07	530/620	100

これらは福岡県工業技術センター生物食品研究所との共同開発製品です。