複合体の作成例【酵素-抗体】
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① |
アルカリフォスファターゼ（ALP）をSulfo-HMCSによりマレイミド化する |
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1. |
ALP 2 mg（14.2 nmol）をトリス緩衝液（0.1 mol/l, pH 7）475 μlに溶解する。 |
| 2. | Sulfo-HMCS 31 mg（71 μmol）を水5 mlに溶解して加える。 ※ Sulfo-HMCSは使用直前に溶解する。 |
| 3. | 氷浴中で1.5時間反応する。 |
| 4. | PD-10カラムで精製する。 |
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② |
マレイミド化ALPとFab’(※)とつなぐ |
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1. |
マレイミド化ALP (0.96 mg、192 μl )に0.1 mol/lリン酸緩衝液(5 mmol/l EDTA、pH6)で溶解したFab’抗体(0.441 mg、0.15 ml)を加える。 |
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2. |
16時間4℃で反応させる。 |
| 3. | 反応液をカラム精製する。 ※ 抗体からFab’を調製する場合には、酵素処理し、F(ab’)2とした後、2-mercaptoethylamine 等で処理を行ってください。 |
