遺伝子導入試薬 HilyMax (ハイリーマックス)	同仁品コード：H357　 1ｍｌ　￥20,000-(本体価格)
・多岐にわたる細胞へDNAを高効率に導入 ・血清を含む培地での導入が可能 ・導入遺伝子の細胞内シグナル応答が良好 ・コストパフォーマンスに優れた純国産導入試薬 　 ・各種細胞への応用（初代培養神経細胞・ショウジョウバエ細胞） 　　・シグナル伝達への利用 　　・siRNA導入例 　　・他社品との比較例 　　・導入手順 　 ・プロトコルのダウンロード　 　　（Optimum protocol download) 　　・導入実績細胞種
−Rat primary corical neurons への導入事例− 　　　　→こちら（PDF)からもご覧いただけます。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　 (データ提供：Johns Hopkins University, Dr. Minori Koga) 　　Culture Condition 　　・Cell : Rat primary corical neurons, 100,000 cells/well 　　・Media : 　　　　　　Media A; Neurobasal Media (500uL) + B-27(10uL) + 0.5mM Glutamine (1.25uL) 　　　　　　Media B; Neurobasal Media (500uL) + B-27(10uL) + 0.5mM Glutamine (1.25uL) + pen/strep (5uL) 　　・Microplate : 24-well plate 　　Transfection Condition 　　・Vector :Conventional expression promoter driven EGFP 　　・Reagent : HilyMax or Company I 　　・Ratio : (Reagent):(Plasmid) = (2.5):(1.5)→(5.0):(1.5) 　　・DNA-HilyMax複合体の調製用培地 : Neurobasal Media 　　　 Neurobasal Media(25μl)+plasmid, Neurobasal Media(25μl)+Reagent 　　　 →それぞれをNeurobasal Mediaに混和、5分間馴染ませた後に混合し、20分インキュベーションする。 　　・遺伝子導入後の培地交換 :　有（3時間後） 　　　＜導入手順＞ 　　　1.　Primary Neuron Cellを24-Well plateにて培養（[Media-B]を使用） 　　　2.　[Medium-B]を300μl取り除き、[Media-A]を250μl添加し、Total 450μlとする。 　　　　　（このとき取り除いた[Media-B]は後から使用するので捨てない→[Media-B']　とする） 　　　3.　ReagentとPlasmidの混合物 50μlを添加し、インキュベーションする。 　　　4.　3時間後、Mediaを交換する。 　　　　　（交換用Media : [Media-B] + [Media-B'] を1:1で混合したものを使用する） 　　　5.　48時間後にイメージングを行う。
−ショウジョウバエ細胞（S2 cell）における導入事例− 　 (データ提供：Max Planck Institute of Neurobiology,　Dr. Takashi Suzuki) 　　Culture Condition 　　・Cell : S2(Schneider 2) cell, 200,000 cells/well 　　・Media : Schneider's Drosophila medium with 10% FCS 　　・Antibiotics : 50 units Penicillin/ml, 20 μg Streptomycin/ml 　　・Microplate : 24-well plate 　　Transfection Condition 　　・Vector : 1 μg/well [ pAct Gal4(6 kb), pUAS-mCD8::GFP(10 kb) ] 　　・Reagent : 5 μl/well 　　・DNA-HilyMax複合体の調製用培地（添加剤） : Schneider's Drosophila medium(without seum and antibiotics) 　　・遺伝子導入後の培地交換 :　有（4時間後） 　　　*培地交換を行っていただくことで、導入効率の向上が認められます。
細胞内へ導入した遺伝子は、一般的に導入操作のみによってタンパクを発現するが、薬物刺激に対して発現する場合もある。 一例として、IL-8プロモーターを組込んだルシフェラーゼ発現プラスミドをA549細胞に導入した場合、HilyMaxで導入した場合と、 他社品で導入した場合とでは、以下のチャートに示す差が観察された。 刺激なし TNF-α添加 TNF-α、 Dexamethasone添加 HilyMax Luciferase活性(RLU) 835 10313 1753 シグナル応答 12.4倍↑ 83％↓ 他社品 Luciferase活性(RLU) 12053 20890 12334 シグナル応答 1.7倍↑ 41％↓ 他社品では、刺激を加える前(刺激なし)からルシフェラーゼが発現している。これをTNF-α刺激するとシグナル応答が増加するが、TNF-α刺激により発現したIL-8の増加量よりも、 ルシフェラーゼ発現量が少ない1) 。一方、HilyMaxで導入を行うと、刺激なしではルシフェラーゼ発現量が少ない。これをTNF-αで刺激することにより、IL-8発現量に相関した シグナル応答がでてくる1) 。 　したがって、HilyMaxはシグナル応答をより明確に測定できることが分かる。一方、他社品の導入試薬は、GFP安定発現するHT1080細胞へ導入試薬のみ 添加すると、試薬濃度依存的にGFP発現量が増加することが確認されている2) 。 1) H. Takei, Y. Baba, A. Hisatsune, H. Katsuki, T. Miyata, K. Yokomizo, and Y. Isohama, Glycyrrhizin Inhibits Interleukin-8 Production and Nuclear Factor-κB Activity in Lung Epithelial Cells, but Not Through Gluco- corticoid Receptors, J Pharmacol Sci., 2008, 106, 460-468. 2) T. Tagami, K. Hirose, J. M. Barichello, T. Ishida, and H. Kiwada, Global Gene Expression Pro?ling in Cultured Cells Is Strongly Influenced by Treatment with siRNA-Cationic Liposome Complexes, Pharmaceutical Research, 2008, 25, 11.
−siRNA用の導入試薬としても使用可能−
	24-wellプレートにてEGFPを発現している細胞に対し、HilyMaxを用いてGFP siRNAを血清存在下でトランスフェクションした。24時間後にフローサイトメトリーにてEGFPのノックダウン率を測定した。 (データ提供：福岡県工業技術センター 生物食品研究所 楠本賢一先生)
【HilyMaxによるsiRNA導入マニュアル】 　siRNAとプラスミドを同時に導入するコトランスフェクションが可能です。 　詳細なプロトコルではありませんが、下記PDFファイルに導入例を示します。 　ご検討の上、ご使用ください。 　　　siRNA導入プロトコル
−汎用されている市販の導入試薬と同等かそれ以上の導入効率− 　　−初代培養細胞、血球系細胞での高効率遺伝子導入− 　　初代培養細胞（COV)への遺伝子導入　　　　　　　　血球系細胞（DT40）への遺伝子導入 　 COV(ニワトリ卵巣由来)細胞およびDT40(ニワトリB細胞由来)細胞にpGL3 vectorを血清存在下で遺伝子導入し、 24時間後にLuciferase活性を測定した。 (データ提供：就実大学薬学部生物薬学科分子細胞薬学ユニット)
−汎用されている細胞へのGFP導入例− 　　　　　　CHO cell 　　　　　　　　　　HEK293 cell　　　　　　　　　　A549 cell 　　　　　　　　　　　　　　　HeLa cell　　　　　　　　　　　　NIH3T3 cell
ワンチューブによるシンプルプロトコール 　　遺伝子導入前の培地交換が不要
*下記ダウンロードファイルはPDFになっております。 　　HilyMax標準プロトコル(日本語)　 　　HilyMax standerd protocol (English)
−多岐にわたる細胞への導入実績− 　　　*導入条件の詳細は、細胞名をクリックしてください。（一部細胞を除く） 　　　導入条件一覧 　使用論文一覧 　 数字-B　　 C-G 　　H-J 　　K-M 　　N-P 　 Q- 　　　　　 　細胞名　 由来 　　細胞種毎プロトコル　　　 　　　導入実績例 使用論文　 293 ヒト 腎臓 293T ヒト 胎児腎臓 3T3-L1 マウス A172 ヒト　グリア芽腫 A549 ヒト　肺上皮癌 ・J, Pharmacol. Sci., 2010, 113(1), 76. ・Clin. Exp. Allergy, 2009, 39(10), 1508. ・J. Parmacol. Sci., 2008, 106(3), 460. adrenal chromaffin cells ウシ副腎髄質細胞     ・Neuropharmacology, 2010, 58(7), 1097 AGS ヒト　胃上皮 ASPC1 ヒト　膵臓 B16 マウスメラノーマ ・Biosci. Biotechnol. Biochem, 2010, 74(11), 2253. BAEC ウシ大動脈内皮細胞 ・生体医工学, 2009, 47(6), 595. ・Biochem. Biophys. Res. Commun., 2007, 361(1), 243. BmN カイコ　　卵巣 bovine fibroblast cell ウシ線維芽 <siRNA>・J. Reprod. Dev., 2010, 56(1), 60. C2C12 マウス　骨芽 ・Neuron, 2011, 69(2), 215. ・J. Biol. Chem., 2011, 286(48), 41455. Caco2 ヒト　腸管上皮 　 ・Mol. Genet. Metab., 2011, 102(1), 91. CEF ニワトリ　胚 CHO チャイニーズハムスター　卵巣 　 ・Autophagy., 2008, 4(1), 131. CHO-S チャイニーズハムスター　卵巣（浮遊） 　 COS1 アフリカミドリサル　腎臓 COS7 アフリカミドリサル　腎臓 　 ・J. Biol. Chem., 2010, 285(22), 16967. COV ニワトリ　卵巣 DLD-1 ヒト結腸腺癌 ・Clin. Cancer. Res., 2010, 16(8), 2320. ＤＴ40 ニワトリ　血球・リンパ系 DU145 ヒト　前立腺癌細胞 ECPC4 脳脈絡叢癌 EF/CT-1 <siRNA>・Endocrinology, 2010, 151 (12), 5873. END-D マウス　血管内皮 GH3 ラット下垂体癌 J. Biol. Chem., 2012, 288, 1706. ESCs E14 マウス　ES細胞 H1395 ヒト　肺癌 H4IIE ラット肝癌 ・J. Health Sci., 2011, 57(3), 264. HaCaT ヒト　皮膚角化細胞 ・J. Biol. Chem., 2011, 286(39), 34121. <siRNA>・Mol. Cell. Biol., 2010, 30(7), 1689. HC ヒト　胎児肝臓 HCT116 p53 ヒト結腸腺癌     ・Nucleic Acids Res, 2011, 39(1), 76. ・Mol. Cell. Biol., 2008, 28(21),6557. HEK293 ヒト　胎児腎臓 　 ・Biol. Pharm. Bull., 2012, 35(2), 380. ・Biochem. Biophys. Res. Commun., 2012, 　　421(2), 329. ・J. Biol. Chem., 2010, 285(29), 22542. ・J. Biol. Chem., 2010, 285(9), 6522. ・Development, 2010, 137(11), 1875. ・Development, 2010, 137(6), 923. ・J. Biochem., 2009, 145 (4), 437. HEK293FT ヒト　胎児腎細胞 HEK293T ヒト　胎児腎細胞 ・J. Virol., 2012, 86 (7), 3851. ・Neuron, 2011, 69(2), 215. ・J. Biol. Chem., 2010, 285(22), 16967. ・PLoS One, 2010, 5(2), e9081. ・Biol. Pharm. Bull., 2010, 33(5), 784. ・J. Biol. Chem, 2010, 285(6), 3568. ・Genes to Cells, 2008, 13(6), 593. ・Biochem. J., 2008, 410, 513. <siRNA>・Genes. Cells, 2011, 16(7),748. HeLa ヒト　子宮頚癌 　 ・PLoS One, 2011, 6(4), e18638. ・Biochem. J., 2009, 425, 445. ・Biochim. Biophysi. Acta, 2010, 1802(9),749. ・Biol. Pharm. Bull., 2008, 31(12), 2334. ・Ann. Hematol., 2008, 87(1), 19. ・J. Biol. Chem., 2007, 282(50), 36671. <siRNA>・FEBS Letters, 2010, 584(16), 3550. HeLaS3 ヒト　肝臓, 胆嚢 HepG2 ヒト　肝臓　胆嚢 　 ・Nucleic Acids Res., 2011, 39(1), 76. ・Cell Death Dis., 2011, 2, e177. ・PloS One, 2008, 3(12), e4068 HFL-1 ヒト　胎児　肺 HHSteC ヒト　肝星細胞 HSG ヒト顎下腺細胞 <siRNA>・Biosci. Rep., 2011, 31(1), 57. HT29 ヒト　結腸癌 ・Ann., Hematol., 2008, 87(1), 19. HUVEC ヒト臍帯静脈内皮細胞 ・Biochem. Biophys. Res. Commun., 2012, 418(4), 641. Human hepatic Stellate ヒト　肝臓 JHH-4 ヒト　肝臓, 胆嚢癌 Jurkat ヒト　白血病性T細胞 K562 ヒト　血球・リンパ系 　　 KINGS1 ヒト　グリア細胞 L マウス　線維芽 L6 ラット　筋組織 　 L929 ラット　繊維芽 LMHl ニワトリ　肝臓癌 LNCap ヒト　前立腺癌 　 MC3T3-E1 マウス　骨芽細胞 MCAS ヒト　卵巣癌 ・Ann. Hematol., 2008, 87(1),19. MCF7 ヒト　哺乳器 　 ・PLoS One, 2011, 6(11), e27441. ・Mol. Pharmacol., 2010, 78(5), 855. ・Cancer Sci., 2009, 100(10), 1834. ・Carcinogenesis, 2008, 29 (9), 1837. Mesenchymal cell ヒト　間葉系幹 MDCK イヌ　腎臓 　 MEF マウス　胎児由来線維芽細胞 MG63 ヒト　骨肉種 MKN ヒト　胃 NB1 ヒト　神経芽細胞腫 NCI-H295R ヒト　副腎腫瘍 Neuro2a マウス　神経系 　 NHLF ヒト正常肺線維芽 <siRNA>・J. Biol. Chem., 2011, 286(37),31932. NIH3T3 マウス　胎仔 　 ・Sci. Rep., 2011, 1, 15. ・J. Biol. Chem., 2010, 285(29), 22114. <siRNA>・Nucl. Acids Res., 2012, 40(19), 9482. PA-1 ヒト　テラトカルシノーマ PanC1 ヒト　膵臓癌 PC12 ラット　副腎髄質 　 PC3 ヒト　前立腺癌 　 REF ラット初代線維芽細胞 ・Oncogene, 2011, 30(26), 2912. ROS 17/2.8 ラット骨芽細胞様細胞 ・J. Biol. Chem., 2009, 284(37), 25230. Primary Osteoblast 初代骨芽細胞 RBL2H3 ラット　血球・リンパ系 Sｆ9 ヤトウガ SHSY-5Y ヒト　神経芽 T98G ヒト　脳グリオブラストーマ THP-1 ヒト単球性白血病 <siRNA>・J. Immunol., 2009, 182(9), 5823. Tn5 昆虫細胞 ・J. Biol. Chem., 2010, 285(6), 3625. U937 ヒト　単球性白血球 　 UtSMC ヒト　子宮平滑筋 Vero アフリカミドリザル　腎臓 VSMC ラット　血管平滑筋 マウス胎児海馬初代培養細胞 マウス　胎児海馬 耳下腺腺房細胞初代培養 耳下腺腺房細胞