分類概要
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖アッセイや死細胞アッセイは、ドラッグスクリーニングや各種物質の毒性分析に用いられている。これらのアッセイは、酵素活性や、細胞膜の状態、細胞接着性、ATP生産量、補酵素量、ヌクレオチド取り込み活性などといった細胞機能を対象にしている。広く用いられている方法としては、Trypan Blueの死細胞と生細胞の染め分けによる細胞数計測法があるが、染色されないという条件だけでは、細胞増殖能を持った細胞と増殖能を失った細胞との区別ができない。そのため、酵素活性をベースにした細胞増殖活性測定方法が使用されるようになってきた。
酵素活性をベースにした細胞増殖活性測定法において、MTTアッセイは、生細胞中のミトコンドリアの脱水素酵素活性をベースにした方法で、最もよく用いられている。MTTは細胞膜を透過し、ミトコンドリアに集積し、補酵素であるリボフラビンにより還元され、紫色のMTTホルマザンとなる。水溶性が低いため、MTTホルマザンは針状結晶となる。したがって吸光度を測定する前に、結晶を有機溶媒で溶解しなければならない。加えて、MTTホルマザンの結晶が析出してくることによって細胞膜が壊れ細胞が死滅してしまう。培地を除く操作では、浮遊してきた細胞を吸い込んでしまい各ウェル間のエラーが大きくなる。
脱水素酵素を指標としたアッセイ
小社では各種WSTを開発してきた。WSTは水溶性ホルマザンを生じるため、MTTアッセイで問題となるホルマザンの不溶化を解消できるため、細胞増殖活性測定や死細胞アッセイへの応用が可能である。WST-8は安定で、乳酸脱水素酵素の補酵素であるNADHから電子伝達物質を介して電子を受け取り還元されて高水溶性のWST-8ホルマザンとなる。Cell Counting Kit-8はWST-8と1-Methoxy PMSを含み、冷蔵保存で1年間安定である。使用濃度では、WST-8も1-Methoxy PMSも細胞毒性は極めて低く、Cell Counting Kit-8を用いたアッセイの後に、追加でアッセイすることも可能である。脱水素酵素を指標としたアッセイは、複数の要因が関わりあう。たとえば、脱水素酵素、NAD、NADH、ミトコンドリア活性などである。一方MTTアッセイはミトコンドリアの脱水素酵素活性のみであるので、ミトコンドリア活性を反映する。また、Cell Counting Kit-8はMTTよりも高感度に測定ができる。また、ホルマザンが水溶性であるので、溶解のプロセスが不要なため、発色後は直ちに吸光度を測定することができる。
エステラーゼ活性を指標としたアッセイ
Cell Counting Kit-Fは細胞増殖アッセイキットであるが、これは細胞のエステラーゼ活性を指標としたものである。Calcein-AM、BCECF-AM、CFSE、FDAなどは無蛍光であるが、細胞膜を透過し、細胞内のエステラーゼで加水分解され蛍光を発するようになる。したがって、生細胞活性をエステラーゼ活性を指標として測定することができる。細胞膜を透過した後は、加水分解されて蛍光性になるが、化合物によって長時間細胞内にとどまるものと、細胞外に放出されるものがある。
製品一覧
- 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット
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製品コード 製品名 容 量 メーカー希望
小売価格富士フイルム
和光純薬CK06 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット
Cell Counting Kit-F500 回用 ￥17,700 343- 07743
CK17 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット
Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit500 tests ￥36,300 346- 09271
E297 酸素消費速度プレートアッセイキット
Extracellular OCR Plate Assay Kit100 tests ￥51,400 347- 10051
SG03 老化細胞検出キット
Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal10 assays ￥47,300 347- 09181
SG05 老化細胞検出キット（マイクロプレート用）
Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal20 tests
100 tests￥13,100
￥37,800345- 09501
341-09503
UP01 グルコース取り込み検出キットBlue
Glucose Uptake Assay Kit-Blue1 set ￥45,800 342- 09871
UP02 グルコース取り込み検出キットGreen
Glucose Uptake Assay Kit-Green1 set ￥43,500 347- 09821
UP03 グルコース取り込み検出キットRed
Glucose Uptake Assay Kit-Red1 set ￥45,800 349- 09881
UP04 アミノ酸取り込み検出キット
Amino Acid Uptake Assay Kit20 tests
100 tests￥18,300
￥51,600346- 09891
342-09893
UP05 シスチン取り込み検出キット
Cystine Uptake Assay Kit20 tests
100 tests￥20,700
￥57,200344- 09951
340-09953
UP07 脂肪酸取り込み検出キット
Fatty Acid Uptake Assay Kit100 tests ￥34,200 343- 10031
- 関連試薬
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製品コード 製品名 容 量 メーカー希望
小売価格富士フイルム
和光純薬A550 ATP測定キット
ATP Assay Kit-Luminescence50 tests
200 tests￥28,700
￥51,600346- 09793
340-09791
A552 ADP/ATP比測定キット
ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence100 tests ￥57,200 346- 09911
C544 細胞数ノーマライゼーションキット
Cell Count Normalization Kit200 tests
1000 tests￥9,600
￥23,500342- 09393
346-09391
C548 細胞周期測定試薬
Cell Cycle Assay Solution Deep Red50 tests ￥14,900 348- 09591
C549 細胞周期測定試薬
Cell Cycle Assay Solution Blue50 tests ￥14,900 341- 09601
D675 オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬
DALGreen - Autophagy Detection20 nmol ￥34,100 344- 09191
D676 オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬
DAPGreen - Autophagy Detection5 nmol ￥43,800 340- 09291
D677 オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬
DAPRed - Autophagy Detection5 nmol ￥42,600 340- 09551
G264 グルコース測定キット
Glucose Assay Kit-WST50 tests
200 tests￥21,300
￥44,800342- 09413
346-09411
G268 グルタミン測定キット
Glutamine Assay Kit-WST100 tests ￥63,000 348- 09611
G269 グルタミン酸測定キット
Glutamate Assay Kit-WST100 tests ￥57,200 345- 09621
G272 解糖系/ミトコンドリア膜電位測定キット
Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit50 tests ￥51,400 345- 10091
N510 NADP/NADPH 測定キット
NADP/NADPH Assay Kit-WST100 tests ￥63,900 344- 09331
