抗体標識キット製品の選び方　同仁化学研究所

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代表的な免疫実験法について原理や特徴を分りやすく解説

これからはじめるELISA・免疫染色

カスタマーサポートの視点からできた、抗体標識実験に必要な情報を集約

はじめての抗体標識プロトコル

抗体標識キットは様々な実験ニーズに対応

タンパク質を定量したい

ELISA

FCM

ウエスタンブロッティング

ボタンは各標識の項目に移動します。

タンパク質の発現場所を見たい

免疫染色

上記ボタンをクリックすると各標識項目に移動します。

このキットは簡単にタンパク質標識が可能！

抗体標識キットへのお客様の声

操作が簡単で使いやすいため、前から利用している

他社製品に比べ安価で試しやすい

同僚が使っていて、おすすめされたから使ってみた

目的の蛍光波長があり、よかった

「はじめての抗体標識プロトコル」の説明が分かりやすく、初心者でも安心して使用できる

操作方法もとっても簡単!!

抗体量 10 µgの場合
ただまぜるだけ！わずか30分で標識抗体を得られます

抗体量 10 µgの場合

ただまぜるだけ！
わずか30分で標識抗体を得られます

抗体量 50-200 µgの場合
フィルトレーションチューブにより大容量でも簡単標識！（バッファー交換等に便利なフィルトレーションチューブはキットに同梱）

抗体量 50-200 µgの場合

フィルトレーションチューブにより大容量でも簡単標識！（バッファー交換等に便利なフィルトレーションチューブはキットに同梱）

-NH₂と-SHどちらの標識方法にも対応！

	-NH₂	-SH
原理
操作方法
メリット	〇還元操作が不要〇標識部位が多い	〇標識によって抗原認識部位が阻害されにくい
デメリット	× 抗原認識部位を阻害する可能性がある	× -NH₂に比べ感度が低い × 実験操作が多い
こんな方へおすすめ	・初めての抗体標識をする方・簡単な操作で標識したい方	・ -NH₂ではうまく標識できなかった方・蛍光タンパクや酵素等分子量の大きいものを標識したい方
対象製品	Fluorescein Labeling Kit -NH₂ Biotin Labeling Kit -NH₂ Peroxidase Labeling Kit-NH₂ Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH₂ HiLyte Fluor^TM 555 Labeling Kit-NH₂ HiLyte FluorTM 647 Labeling Kit-NH₂ Allophycocyanin Labeling Kit-NH₂ R-Phycoerythrin Labeling Kit-NH₂ ICG Labeling Kit-NH₂ Ab-10 Rapid Fluorescein Labeling Kit Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 555 Labeling Kit -NH₂ Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 647 Labeling Kit -NH₂	Peroxidase Labeling Kit-SH Biotin Labeling Kit -SH Alkaline Phosphatase Labeling Kit-SH Allophycocyanin Labeling Kit-SH R-Phycoerythrin Labeling Kit-SH

標識の対象から詳しく見る

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ビオチン標識キット

ビオチン標識キット原理

こんな方にオススメ

検出したい対象が、微量でよく観察できない

蛍光色素を標識しても見えなかった

イメージング実験例

使用キット：Biotin Labeling Kit-SH

突発性肺線維症(IPF)症例における軌道上皮細胞の二重免疫蛍光染色

（画像提供：熊本大学医学部教授赤池孝章先生）

Biotin Labeling Kit-SH を用いてAnti-Nitroguanosine monoclonal 抗体（Code: ABO2）のビオチン標識抗体を作成し、 8ーニトログアニンの生成を検出した（Fluorescein標識ストレブトアビジン蛍光染色）。
A：8ーニトログアニン(緑)とiNOS(赤)
B：細胞の明視野像
C：8ーニトログアニン(緑)と8ーオキソグアニン(赤)
D:8ーニトログアニン（緑）とミトコンドリア（赤）のmerge画像。 8ーニトログアニンは、ミトコンドリアに特に強い局在を示す。

FCM実験例

使用キット：Biotin Labeling Kit-NH₂

competitive-inhibition

抗X抗体をBiotin Labeling Kit-NH₂によりビオチン標識後、streptavidin-APCを用いてフローサイトメトリーで解析した。

(A) 未標識抗×抗体を反応後、ビオチン化抗×抗体を反応

(B) ビオチン化抗×抗体のみ反応

抗原を未標識抗×抗体でブロックした(A)では、抗体の競合阻害によりビオチン化抗x抗体の反応は見られず、ビオチン化抗x抗体のみを反応させた(B) において陽性分画が見られた。自製の標識抗体においても非特異的反応の少ない十分な検出反応を行うことが可能である。

（データ提供：北海道大学遺伝子病制御研究所黒滝大翼先生、今重之先生）

>> 免疫染色の高感度化でお困りの方へ: CLAMP法をご検討ください。

ELISA実験例

使用キット：Biotin Labeling Kit-NH₂

使用キット：Biotin Labeling Kit-SH

く実験例1 ＞

サンドイッチELISA(NH₂タイプ使用)

Anti-CAT lgG 100 µgをBiotin Labeling Kit-NH₂(BLK-NH₂)を用いてビオチン標識し、サンドイツチELISAにより Chloramphenicol Acetyltransferase(CAT）を検出した。本キットを用いて作製したビオチン標識抗体を用いた場合、他社ビオチン化キットに比べ、1.5 -2倍高感度であった。

Biotin Labeling Kit-NH₂および他社品キツトを用いて作製したビオチン標識Anti-CAT(Chloramphenicol Acetyltransferase)抗体を用いたELISA

＜実験例2＞

サンドイッチELISA(SHタイプ使用)

Anti-CAT lgG 100 µgをBiotin Labeling Kit-SH(BLK-SH)を用いてビオチン標識し、サンドイッチELISAによりChloramphenicol Acetyltransferase(CAT)を検出した。本キットを用いて作製したビオチン標識抗体を用いた場合、他社ビオチン化キットに比べ、10-12倍高感度であった。

Biotin Labeling Kit-SHおよび他社品キットを用いて作製したビオチン標言哉Anti-CAT(Chloramphenicol Acetyltransferase)抗体を用いたELISA

ラインナップ

ビオチン	サンプル量・種類	標識対象	品名	解析方法
ビオチン	10 μg 抗体	-NH₂	Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit
	50-200 μg 抗体・タンパク質	-NH₂	Biotin Labeling Kit -NH₂
	50-200 μg 抗体・タンパク質	-SH	Biotin Labeling Kit -SH
	1 mg 抗体	-NH₂	Biotin Labeling Kit - NH₂ (for 1mg)
	1-5 mg 抗体・タンパク質	-NH₂	Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)

詳しい操作方法は「はじめての抗体標識プロトコル」へ