① 固定化後も観察が可能

僅かな細胞状態の変化によりミトコンドリア膜電位は変動するため、データの再現性取得には細心の注意が必要でした。汎用のミトコンドリア膜電位検出試薬（JC-1、TMRE）は、細胞を固定化処理すると蛍光が失われるため、生細胞を用いた迅速な測定が必要でした。
MT-1 は、染色後のPFA固定化操作を行っても蛍光が保持されるため、再現性の高い実験を行う事が可能です。

検出条件
Ex: 530-560 nm, Em: 570-640 nm
スケールバー: 100 μm
細胞：HeLa細胞

 

② モニタリングが可能

薬剤刺激を行っていないコントロール細胞を各試薬で染色し、蛍光強度の変化を確認しました。結果、JC-1やTMREは染色から約10分程で蛍光強度が低下し、MT-1は一定に蛍光強度を保ちました。

検出条件 Ex: 530-560 nm, Em: 570-640 nm スケールバー：100 µm 細胞：HeLa細胞

③ 高感度検出が可能

わずかなミトコンドリア膜電位の変化は、JC-1では検出困難なケースがあり、その際にTMREが用いられてきました。MT-1はTMREと同等の検出感度を実現しています。

検出条件
Ex: 530-560 nm, Em: 570-640 nm
細胞：HeLa細胞

各試薬との比較

化合物(製品名)	特徴	固定化 (染色後)	感度	モニタリング	装置の対応	検出
JC-1 (JC-1 MitoMP Detection Kit)	※初めての方へオススメ ・JC-1の溶けにくいを解消 ・キット化で簡便な測定 ・論文実績が最も多い	×	△	×		緑 Ex  ：450-490 nm 　 Em：500-550 nm 赤 Ex  ：530-560 nm 　 Em：570-640 nm
本製品 MT-1 (MT-1 MitoMP Detection Kit)	※より詳細に解析したい方へオススメ ・固定化後の観察が可能 ・経時変化の観察が可能 ・TMREと同等の感度	〇	〇	〇	※プレートリーダーの実績有	赤 Ex  ：530-560 nm 　 Em：570-640 nm
TMRE	・ミトコンドリア膜電位の検出に広く使用されている	×	〇	×		赤 Ex  ：530-560 nm 　 Em：570-640 nm

操作の流れ

実験例：脱分極による評価例

HeLa 細胞を脱分極剤であるcarbonylcyanide-p-trifluoromethoxyphenylhydrazone（FCCP）にて処理し、本キットで膜電位の変化をタイムラプス観察しました。
結果、FCCP で処理した細胞はミトコンドリア膜電位が低下する様子を確認できました。

実験例：アポトーシス誘導時のミトコンドリア膜電位変化

あらかじめMT-1で染色したHL60細胞にを添加してアポトーシスを誘導したのち、Annexin V, FITC Conjugate と共染色してフローサイトメトリーで解析しました。
結果、Annexin V-FITC由来の蛍光強度変化(緑色蛍光強度の増加)からアポトーシスの進行と、MT-1由来の蛍光強度変化(赤色蛍光強度の低下)からミトコンドリア膜電位の変化が確認されました。

検出条件
Annexin V-FITC（緑）： Ex. 488 nm / Em. 500 - 560 nm
ミトコンドリア膜電位（MT-1、赤）：Ex 488 nm / Em 564-604 nm

実験例：ミトコンドリアスーパーオキサイドと膜電位の同時測定

HeLa細胞をHBSSにて洗浄後、本製品と小社ミトコンドリアスーパーオキサイド検出試薬(MitoBright ROS Deep Red 製品コード:MT16)を用いて共染色し、発生したミトコンドリアROSと膜電位を同時に観察しました。
その結果、いずれの条件でもミトコンドリアROSの発生に伴うミトコンドリア膜電位の低下を同時に観察することが出来ました。

＜実験操作＞

検出条件（共焦点レーザー蛍光顕微鏡）
MT-1： Ex = 561, Em = 560-600 nm
MitoBright ROS： Ex = 633 nm, Em = 640-700 nm
スケールバー：10 µm

検出条件（マイクロプレートリーダー）Tecan, Infinite M200 Pro
MT-1： Ex = 540-550 nm, Em = 590-610 nm (Gain = 200)
MitoBright ROS ：Ex = 545-555 nm, Em = 665-685 nm