p47が抑えるHER2乳癌転移とオートファジー新知見

転移は乳癌死亡の主因だが、その分子機構の全貌は未解明な点が多い。本論文ではオートファジー関連171遺伝子から成るカスタムCRISPR-Cas9ライブラリを用い、MMTV-Neu由来腫瘍細胞をヌードマウス乳腺に同所移植するin vivoスクリーニングを実施した。解析の結果、Nsfl1c遺伝子産物p47が肺転移を選択的に抑制するキー因子として浮上した。p47欠損株は原発腫瘍の増殖に影響せず、肺転移のみを顕著に増強したことから、p47は転移カスケード初期を制御することが示唆される。
メカニズム解析では、p47喪失によりNEMO(NF-κB essential modulator)のエンドソーム輸送が阻害され、NF-κBシグナルが活性化する一方、リソソーム損傷修復とオートファジー・フラックスが低下することが判明した。これら複合的な障害が遊走・浸潤能を高め、転移を促進すると考えられる。ヒト臨床データでもp47低発現例は転移頻度と死亡率が高く、マウス結果との整合性が確認された。
これらの結果は、オートファジー・リソソーム経路と炎症性NF-κB経路を同時に制御する転移抑制ハブとしてp47を位置づけ、HER2陽性乳癌における新たな治療標的や予後バイオマーカーとなり得ることを示している。研究者にとっては、機能別ライブラリを組み込んだ in vivoスクリーニングの有用性と、複数経路を串刺しにした制御因子探索の戦略的価値を示す好例と言えるだろう。

In vivo CRISPR knockout screen identifies p47 as a suppressor of HER2+ breast cancer metastasis by regulating NEMO trafficking and autophagy flux

論文へのアクセスはこちら:  Hao, M., et al, Cell Reports, (2024)

注目ポイント

・偏りのない in vivo CRISPRスクリーニングで、p47をHER2陽性乳癌転移抑制因子として発見

・p47欠損によりNEMOの輸送が阻害され、その結果NF-κB活性化とオートファジー停滞を引き起こし、転移能を増幅

・ヒト乳癌データでp47低発現は転移増・生存率低下と直結し、臨床バイオマーカーの可能性大

関連製品
オートファジー経路測定キット
Autophagic Flux Assay Kit
オートファジー(オートリソソーム)検出試薬
DALGreen - Autophagy Detection
オートファジー(オートファゴソーム)検出試薬
DAPGreen / DAPRed - Autophagy Detection
エンドサイトーシス検出試薬
ECGreen-Endocytosis Detection
細胞増殖/細胞毒性アッセイキット
Cell Counting Kit-8
アプリケーションデータ

Bafilomycin A1 によるオートリソソームの形成阻害の解析

 

 DALGreenおよびDAPRedで染色したHeLa細胞を用いて、リソソーム酸性化阻害剤バフィロマイシンA1(Baf.A1)により誘導されるオートファジーによる一連の流れの変化を評価した。飢餓状態と比較して、Baf.A1の添加によるオートリソソーム形成阻害条件下では、DALGreenの蛍光シグナルは減少した。一方、DAPRedの蛍光シグナルは同条件下で増加したことから、Baf. A1はオートファゴソームの蓄積を誘導した。

 

実験データ

 

<実験条件>
CTRL: 通常培養条件、Stv.: 飢餓誘導条件、Baf. A1: オートリソソーム形成阻害条件
DALGreen検出条件: 488 nm (Ex), 490–550 nm (Em)
DAPRed検出条件: 561 nm (Ex), 565–700 nm (Em)


<使用製品>
Autophagic Flux Assay Kit

Science Noteのバックナンバーはこちらから!

 

技術情報を探す

3分野

これからはじめる 細胞死検出

これからはじめる オートファジー検出

これからはじめるリソソーム検出

これからはじめる 細胞膜動態研究

これからはじめる 細胞内代謝測定

細胞の栄養素取込み
これからはじめる フェロトーシス検出
これからはじめる 細胞増殖/細胞毒性測定
これからはじめる ミトコンドリア研究
これからはじめる 老化細胞検出
これからはじめるELISA・免疫染色
抗体標識キット 製品の選び方
これからはじめる微生物実験
これからはじめる バイオフィルム研究
これからはじめる バイオセンサー
CLAMP法

製品分類一覧

分類一覧から探す